结核分枝杆菌毒力基因片段Rv0450c分子克隆及原核表达

• 作者: 吴俐健 孙美秋 李嵚 王笑歌 苍保宏 贾本智 邹傅
• 来源期刊: 中国公共卫生
• 学科: 医学
• 关键词: 结核分枝杆菌 多药耐药外排泵系统 Rv0450c 表达
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 专题报道之三——你我共同参与,消除结核危害
• 页码范围: 415-417
• 分类号: R378.91+1
• 语种: 中文

摘要

目的 通过分子克隆的方法对结核分枝杆菌H37Rv中编码MMPL4蛋白的Rv0450c基因以及编码该蛋白一个161氨基酸的膜内区域(I161)和一个371氨基酸的膜外区域(O371)的基因片段在大肠杆菌中的表达和纯化方法进行研究,为进一步探讨MMPL4与结核分枝杆菌耐药相关功能性研究以及抗体制备提供依据.方法 以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增Rv0450c基因片段,并克隆到原核表达载体pET28b质粒中,获得的重组质粒转化原核表达宿主大肠杆菌BL2 1(DE3) pLysS中,经IPTG诱导后SDS-PAGE电泳方法检测重组蛋白的表达,并进行纯化.结果 从结核分枝杆菌基因组H37 RvDNA中成功扩增出Rv0450c基因及编码I161/O371的DNA片段,并构建原核表达质粒pET28b-Rv0450c,pET28b-I161和pET28b-O371重组MMPL4蛋白和I161在大肠杆菌中表达不明显,而膜外区域O371以包涵体形式高表达.结论 Rv0450c基因原核表达质粒可以成功构建并在大肠杆菌内较好表达,为进一步MMPL4功能研究和抗体制备打下良好基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	贾本智	中国医科大学附属第四医院结核科	17	61	4.0	7.0
2	王笑歌	中国医科大学附属第四医院结核科	80	368	10.0	16.0
3	吴俐健	中国医科大学附属第四医院结核科	19	109	6.0	10.0
4	孙美秋	中国医科大学附属第四医院结核科	5	29	2.0	5.0
5	苍保宏	中国医科大学附属第四医院结核科	3	18	1.0	3.0
6	李嵚	中国医科大学附属第四医院结核科	7	14	2.0	3.0
7	邹傅	中国医科大学附属第四医院结核科	1	0	0.0	0.0