DKK1真核表达质粒的构建及表达产物鉴定

• 作者: 包广宇 崔素芬 徐亮 陆奎英
• 来源期刊: 国际检验医学杂志
• 关键词: 蛋白质类 细胞 培养的 哺乳动物 基因表达
• 年，卷（期）: 2012,（23）
• 所属期刊栏目: 基础实验研究论著
• 页码范围: 2819-2821
• 页数: 3页
• 字数: 2996字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4130.2012.23.002

摘要

目的 构建人DKK1基因的真核表达质粒,表达、纯化、鉴定其表达产物.方法 自宫颈癌组织提取癌细胞,抽提mRNA,RT-PCR获得人DKK1基因片断,构建重组质粒pCMV-HA2/DKK1,EcoRⅠ酶切、测序鉴定重组质粒;借助脂质体将载体瞬时转染入Free-Style 293-F细胞(无血清培养)蛋白印迹法检测DKK1蛋白.结果 RT-PCR获得片断与预期结果相符,酶切鉴定、测序鉴定证实pCMV-HA2/DKK1重组质粒构建成功;DKK1蛋白分泌表达在Free-Style 293-F细胞培养液中,Western Blot鉴定表达产物为DKK1蛋白.结论 成功构建了人DKK1的真核表达质粒,并对该基因的真核表达产物进行鉴定,为下一步的DKK1蛋白对肿瘤发生中的生物学活性研究奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陆奎英	江苏省扬州市第一人民医院检验科	15	31	3.0	5.0
2	包广宇	江苏省扬州市第一人民医院检验科	12	42	3.0	6.0
3	徐亮	江苏省扬州市第一人民医院检验科	10	11	2.0	3.0
4	崔素芬	江苏省扬州市第一人民医院检验科	3	10	2.0	3.0