重组Kinectin蛋白的表达、纯化及应用研究

• 作者: 晁耐霞 罗国容 莫发荣 谢小薰 赵飞兰 黄天明
• 来源期刊: 中国实验诊断学
• 学科: 生物学
• 关键词: 肿瘤相关抗原 kinectin 重组蛋白 诱导 树突状细胞
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1-4
• 分类号: Q786|Q789
• 字数: 4064字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-4287.2012.01.001

摘要

目的 优化重组kinectin蛋白的诱导表达及纯化条件;探讨用其致敏的树突状细胞(DC)对自体T淋巴细胞增殖能力的影响.方法 以pMAL-C2为载体构建重组质粒,并转入TB1宿主菌.从IPTG加入时机、诱导温度、诱导时间及IPTG浓度方面对工程菌的诱导条件进行优化;过Amylose-resin亲和层析柱对诱导产物进行分离纯化.用获取的MBP-kinectin融合蛋白致敏从人外周血中分离培养的DC,并用ELISA检测细胞上清液中的IL-12、IFN-γ含量;再用MTT法检测致敏DC刺激自体T淋巴细胞增殖的能力.结果 工程菌在37℃振荡培养2个小时后加入终浓度为0.5 mmol/L的IPTG,降低温度到34℃继续诱导3个小时,可明显提高诱导效率;所得MBP-kinectin与DC共培养上清液中IL-12、IFN-γ含量分别为(615.32±7.93)pg/ml,(544.28±7.17)pg/ml,用其刺激的T淋巴细胞增殖指数为53.14±0.62,均高于麦芽糖结合蛋白(MBP)组和空白对照组,且差异有统计学意义.结论 pMAL-C2载体可用于构建kinectin重组质粒;通过对诱导条件的优化,可获得较高的诱导效率;所得MBP-kinectin融合蛋白能致敏DC并具有很强的刺激自体T淋巴细胞增殖的能力.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵飞兰	广西医科大学组织学与胚胎学教研室	7	37	3.0	6.0
2	罗国容	广西医科大学组织学与胚胎学教研室	78	267	9.0	12.0
3	谢小薰	广西医科大学组织学与胚胎学教研室	71	221	8.0	11.0
4	莫发荣	广西医科大学组织学与胚胎学教研室	42	107	6.0	8.0
5	晁耐霞	广西医科大学组织学与胚胎学教研室	19	31	3.0	4.0
6	黄天明	广西医科大学组织学与胚胎学教研室	28	19	2.0	2.0