李矮缩病毒外壳蛋白基因克隆及原核表达研究

• 作者: 严雪瑞 刘庆忠 宗晓娟 徐丽 王文文 王甲威 陈立伟 魏海蓉
• 来源期刊: 中国农学通报
• 学科: 农学
• 关键词: 李矮缩病毒 外壳蛋白 基因克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2012,（12）
• 所属期刊栏目: 生物技术—研究报告
• 页码范围: 177-181
• 分类号: S432.1
• 字数: 3885字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-6850.2012.12.032

摘要

为制备李矮缩病毒(prunus dwarf virus,PDV)抗血清,克隆PDV外壳蛋白(CP)基因,构建原核表达载体,优化蛋白表达条件.以阳性感病甜樱桃叶片为试验材料,提取总RNA,根据PDV CP基因(L28145.1)设计特异引物,RT-PCR方法扩增,克隆、测序,构建原核表达载体pET 30a- PD VCP,在大肠杆菌BL21(DE3)菌株表达.PDV CP基因(GenBank登录号:JF333587.1)全长657 bp,编码217个氨基酸,与GenBank其他PDV分离物CP基因核苷酸序列的同源性为89.2％～93.9％,推导的氨基酸序列同源性为97％～99％.根据完整CP基因核苷酸序列构建系统进化树显示:12个PDV分离物可分为3组,泰安分离物与巴西、土耳其等分离物属于Ⅰ组.成功构建原核表达载体pET30a-PDVCP,并在体外条件下诱导表达出融合蛋白.转pET30a-PDVCP载体的大肠杆菌BL21(DE3)菌株表达分子量约24 kDa的重组蛋白.该重组蛋白在30℃,1.0 mmol/L IPTG、诱导4h表达量最大.