功能未知基因C17orf77重组蛋白及多克隆抗体的制备

• 作者: 孙月 孟雪 张仁雯 李兴旺 李辉 詹永婧 郝晓花 顾红岩 魏红山
• 来源期刊: 中国肝脏病杂志(电子版)
• 关键词: 肝炎病毒,乙型 基因 抗体 重组蛋白质类
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 页码范围: 12-18
• 字数: 4715字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7380.2013.01.003

摘要

目的体外克隆表达C17orf77重组蛋白,制备其多克隆抗体,初步探索该蛋白的生物学作用,观察其细胞系分布特征.方法以HepG2细胞cDNA为模板,PCR扩增C17orf77目的基因片段,构建pET-32a(+)-C17orf77原核表达载体.转化大肠埃希菌,IPTG诱导C17orf77重组蛋白表达并进行Western blot鉴定.以重组蛋白免疫大耳白兔,获得兔抗C17orf77蛋白多克隆抗体,并分析其特异性及检测效价.MTT法观察不同浓度重组蛋白对HepG2细胞增殖的影响.利用Western blot观察C17orf77蛋白在HepG2、L02、LX2和Jurkat细胞系的表达情况.结果PCR扩增获得C17orf77基因片段,成功诱导表达了C17orf77重组蛋白.制备了多克隆抗-C17orf77,ELISA检测抗体效价>1∶1280000.不同浓度C17orf77重组蛋白对HepG2细胞无明显增殖促进或抑制活性(P>0.05).C17orf77蛋白在HepG2、L02、LX2和Jurkat细胞系均有分布.结论利用体外克隆表达的C17orf77重组蛋白可制备效价和特异性均较高的多克隆抗体.HBV感染相关基因C17orf77在体外肝脏的间质和实质细胞,以及CD4+ T细胞系(Jurkat细胞)均有不同程度的表达.提示该基因可能与HBV感染的致病过程相关.