大肠杆菌O157∶H7异硫氰酸荧光素标记抗体的制备及评价

• 作者: 孟日增 方珍 潘风光 秦亚楠 鞠文
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 大肠杆菌O157∶H7 多克隆抗体 荧光免疫 异硫氰酸荧光素
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 方法学
• 页码范围: 165-169,封3
• 页数: 6页
• 分类号: R155|R378.21
• 字数: 3090字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7694/jldxyxb20130137

摘要

目的:制备高效价、高纯度、特异性好、荧光强度高及稳定的抗大肠杆菌O157∶H7异硫氰酸荧光素(FITC)标记抗体,初步探讨其在大肠杆菌荧光免疫检测试验中的应用.方法:复苏培养E.coli O157∶H7标准菌株,甲醛灭活制备疫苗免疫家兔.4次免疫后,颈动脉采血分离血清,经辛酸-饱和硫酸铵法粗提后应用蛋白亲和层析柱HiTrap Protein G HP进行IgG纯化,借助SDS-PAGE电泳、BCA试剂盒法、间接ELISA法分别对蛋白纯度、蛋白含量及抗体效价进行测定.应用不同FITC与蛋白量比值以及不同标记反应条件对多克隆抗体进行标记.比较荧光抗体F485/535,结合差异性显著分析对FITC与蛋白量比值及反应条件进行合理选择,应用标记抗体与E.coli O157∶H7和金黄色葡萄球菌混合菌液反应验证标记效果.结果:HiTrap Protein G进行E.coli O157∶H7多克隆抗体纯化的最佳纯化方法为35％、100％二梯度洗脱,制备抗体效价为1∶25 600,与沙门氏菌、阴沟肠杆菌等8种肠杆菌无交叉反应,最佳FITC与蛋白量比值为1∶10,最佳标记反应条件为20℃、2h.由最佳条件制得的荧光抗体与E.coli O157∶H7反应明显,强荧光连续照射15 min后仍显示高亮度荧光反应,且不与金黄色葡萄球菌反应.结论:本实验首次制备出纯度高、荧光强度高、持续时间长的E.coli O157∶H7 FITC标记多克隆抗体,为E.coli O157∶H7荧光免疫检测方法的建立完成了关键步骤.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孟日增	吉林大学公共卫生学院卫生检验教研室	49	269	8.0	15.0
3	潘风光	吉林大学军需科技学院食品质量与安全教研室	42	319	8.0	17.0
4	方珍	吉林大学军需科技学院食品质量与安全教研室	1	8	1.0	1.0
5	鞠文	吉林大学公共卫生学院卫生检验教研室	2	8	1.0	2.0
6	秦亚楠	吉林大学军需科技学院食品质量与安全教研室	2	14	2.0	2.0