AcAP5蛋白N端片段的表达、纯化与活性评价

• 作者: 刘晓岩 刘爱华 朱元军 王银叶
• 来源期刊: 中国药学（英文版）
• 学科: 医学
• 关键词: 犬钩虫抗凝肽5 FXa结合结构域 FXa抑制作用 表达 纯化
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 268-271
• 页数: 4页
• 分类号: R962.1
• 语种: 英文
• DOI: 10.5246/jcps.2013.03.038

摘要

犬钩虫抗凝肽5 (Ancylostoma anticoagulant peptide 5,AcAP5)N端40个氨基酸片段(N40)含有与FXa结合的结构域.为研究N40的FXa抑制作用,我们克隆、表达和纯化了N40,并检测其生物活性.用PCR扩增N40基因；将PCR产物克隆至原核表达载体pET-30a中,构建质粒pET30a-N40;将其转化入大肠杆菌E.coli.BL21 (DE3)中,IPTG诱导目的蛋白表达,SDS-PAGE电泳鉴定,经过镍柱亲和层析纯化,用BCA法进行蛋白定量,测定该蛋白抑制FXa的活性.限制性酶切鉴定和基因测序结果显示重组质粒构建成功；SDS-PAGE结果显示目的蛋白在E.coli.BL21(DE3)中为可溶性表达,亲和层析纯化后获得了纯度约90％的蛋白,经活性鉴定该蛋白确有抑制FXa的活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王银叶		34	268	9.0	16.0
2	刘晓岩		25	119	7.0	10.0
3	朱元军		9	1	1.0	1.0
4	刘爱华		5	42	3.0	5.0