水牛生长分化因子9成熟肽基因克隆及重组蛋白质和多克隆抗体的制备

• 作者: 于建宁 刘玉鹏 彭中友 施振旦 郭日红 陈瑞爱 雷明明
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 生长分化因子9 成熟肽 克隆和表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医·水产养殖
• 页码范围: 346-351
• 页数: 6页
• 分类号: S823.8+3
• 字数: 4069字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2013.02.020

摘要

为了获得水牛生长分化因子9(Growth differentiation factor 9,GDF9)重组蛋白质和抗GDF9抗体,根据GDF9基因编码区序列(GenBank:FJ529501.1)设计1对引物,用水牛基因组DNA为模板扩增水牛GDF9成熟肽基因序列,并与其他反刍动物的GDF9成熟肽基因序列进行同源性比较.将该序列克隆到表达载体pRSET-A的BamH Ⅰ和HindⅢ酶切位点之间以构建重组表达载体,并将重组表达载体转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3),转化菌经IPTG诱导表达重组蛋白质.经Ni-NTA凝胶纯化后的重组蛋白质与矿物油佐剂混合免疫新西兰兔制备抗GDF9抗血清,使用ELISA方法检测血清抗体效价,从抗血清中进一步纯化GDF9抗体.结果显示,成功获得了水牛GDF9成熟肽基因序列,该序列在牛和其他反刍动物之间高度同源.成功构建了重组表达载体并转化大肠杆菌E.coli BL21 (DE3),E.coli BL21(DE3)经IPTG诱导后表达了分子量为1.96× 104的GDF9重组蛋白质,其最高表达量达到菌体蛋白质总量的30％左右.成功制备了抗GDF9抗血清,血清效价达到1∶51 200,抗血清经纯化后得到了高纯度的GDF9抗体.GDF9重组蛋白质和抗GDF9抗体有望应用于提高羊繁殖性能和促进动物胚胎发育的研究和技术开发.