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人QKI6基因重组腺病毒载体的构建及其在心肌细胞中的表达鉴定
人QKI6基因重组腺病毒载体的构建及其在心肌细胞中的表达鉴定
作者:
曾迪
李雪
欧东波
胡杏林
苏菲菲
郑强荪
郭万刚
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
RNA结合蛋白6
重组腺病毒
载体构建
摘要:
目的:构建人RNA结合蛋白(QKI6)基因的重组腺病毒载体,并在心肌细胞中表达.方法:利用PCR技术,从原始质粒中扩增出QKI6目的基因片段,酶切后连接到pShuttle-GFP-CMV重组穿梭质粒上.再将pShuttle-GFP-QKI6转移到pAdxsi载体上,得到带有QKI6目的基因及GFP荧光指针的重组腺病毒载体pAdxsi-GFP-QKI6.酶切、PCR鉴定重组腺病毒载体pAdxsi-GFP-QKI6,并完成扩增与纯化.经Pacl线性化后,转染HEK 293细胞进行腺病毒包装,并测定病毒的滴度及目的基因的表达.以包装好的重组腺病毒感染大鼠新生心肌细胞,通过GFP表达观察病毒感染效率.用PCR检测目的基因QKI6在感染的心肌细胞中的表达.结果:含QKI6基因及GFP荧光指针的重组腺病毒载体pAdxsi-GFP-QKI6构建成功,酶切、PCR鉴定及DNA测序证实了其正确性.重组腺病毒可重复感染HEK 293细胞,荧光显微镜下可见GFP表达,且QKI6基因的表达明显升高.包装的重组腺病毒可有效感染新生心肌细胞,并表达目的基因QrI6.结论:成功地构建QKI6基因重组腺病毒载体,以其感染293细胞及新生心肌细胞后,可有效地表达QKI6基因,为进一步研究QKI6基因在糖尿病心肌细胞凋亡的机制以及在糖尿病性心肌病治疗中的应用奠定实验基础.
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篇名
人QKI6基因重组腺病毒载体的构建及其在心肌细胞中的表达鉴定
来源期刊
心脏杂志
学科
生物学
关键词
RNA结合蛋白6
重组腺病毒
载体构建
年,卷(期)
2013,(4)
所属期刊栏目
基础研究
研究方向
页码范围
408-413
页数
6页
分类号
Q343.1
字数
语种
中文
DOI
五维指标
作者信息
序号
姓名
单位
发文数
被引次数
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郑强荪
222
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李雪
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欧东波
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曾迪
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研究主题发展历程
节点文献
RNA结合蛋白6
重组腺病毒
载体构建
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
心脏杂志
主办单位:
第四军医大学
中国老年保健医学研究会心脏学会
中国医药信息学会心功能学会
出版周期:
双月刊
ISSN:
1009-7236
CN:
61-1268/R
开本:
大16开
出版地:
西安市长乐西路169号
邮发代号:
52-131
创刊时间:
1989
语种:
chi
出版文献量(篇)
4968
总下载数(次)
5
总被引数(次)
18666
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