应用Gateway技术构建过表达β-catenin基因的慢病毒载体

• 作者: 吴倩 曹燕雯 李瑜元 陈其慧 魏亚明
• 来源期刊: 国际生物医学工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 多位点Gateway技术 β-catenin 过表达 慢病毒载体 293T细胞
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 207-211,后插2
• 页数: 6页
• 分类号: Q789
• 字数: 4420字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1673-4181.2013.04.004

摘要

目的 应用Gateway技术构建靶向过表达β-catenin基因的慢病毒载体,验证该载体的功能.方法 利用多位点Gateway克隆技术,通过BP重组反应,构建穿梭载体pDown-Ctnnb1；再通过LR重组反应,将pUp-EF1A、pDown-Ctnnb1、pTail-IRES/DsRed-Express2和母载体pLV.Des3d.P/puro 4个质粒构建成表达载体pLV.EX3d.P/puro-EF1A＞Ctnnb1 ＞IRES/DsRed-Express2;再转化到感受态细胞stbl3,经PCR筛选菌落阳性克隆测序鉴定.将成功构建的慢病毒表达载体转染293T细胞,用实时荧光定量PCR法验证重组载体对β-catenin基因mRNA水平的影响.结果 菌落PCR筛选和DNA测序鉴定显示入门克隆和表达载体插入片段序列正确,实时荧光定量PCR证实β-catenin基因mRNA水平显著上调(P＜0.01).结论 成功构建能显著上调β-catenin基因mRNA表达的慢病毒载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	魏亚明	广州医学院附属广州市第一人民医院输血科	19	130	4.0	11.0
2	李瑜元	广州市临床医学研究所广州医学院附属广州市第一人民医院消化科	2	4	1.0	2.0
3	吴倩	广州市临床医学研究所广州医学院附属广州市第一人民医院消化科	1	1	1.0	1.0
4	曹燕雯	广州市临床医学研究所广州医学院附属广州市第一人民医院消化科	1	1	1.0	1.0
5	陈其慧	广州市临床医学研究所广州医学院附属广州市第一人民医院消化科	1	1	1.0	1.0