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低氧诱导因子基因重组腺病毒载体的构建及其在内皮细胞中的表达
低氧诱导因子基因重组腺病毒载体的构建及其在内皮细胞中的表达
作者:
哈小琴
姜东红
彭俊华
杨志华
董菊子
赵勇
邓芝云
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
低氧诱导因子-1α
遗传载体
内皮细胞
重组,遗传
基因表达
摘要:
目的:构建携带低氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因的腺病毒载体(pAdxsi-GFP-HIF),观察其在内皮细胞中的表达.方法:低氧处理A549细胞后提取总RNA并逆转录为cDNA,以之作为模板,依据基因库公布的HIF-1 αcDNA设计引物,分别引入KpnI和BamHI酶切位点,PCR扩增后将目的基因HIF-1α连接到载体pShuttle-CMV-EGFP上,构建穿梭质粒pShuttle-GFP-HIF.采用细菌内重组方法将目的序列重组到pAdxsi病毒骨架载体上构建携带HIF-1α基因的重组腺病毒载体.检测重组腺病毒效价后,转染人脐静脉内皮细胞ECV304,检测目的基因的转染表达.结果:通过对构建质粒克隆进行测序及酶切,证实携带HIF-1α基因的重组腺病毒载体pAdxsi-GFP-HIF构建成功,且构建的重组腺病毒纯度好、效价高.以100 MOI转染ECV304细胞24 h后在荧光显微镜下可观察到细胞有较强的绿色荧光表达,转染48 h时荧光表达更强,且培养上清液中HIF-1蛋白表达水平为(48.93±3.86) ng/mL.结论:本实验构建的携带HIF-1α基因的腺病毒载体pAdxsi-GFP-HIF转染效率及目的基因的蛋白表达水平均较高,有望应用于缺血缺氧组织局部.
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文献信息
篇名
低氧诱导因子基因重组腺病毒载体的构建及其在内皮细胞中的表达
来源期刊
浙江大学学报(医学版)
学科
生物学
关键词
低氧诱导因子-1α
遗传载体
内皮细胞
重组,遗传
基因表达
年,卷(期)
2013,(6)
所属期刊栏目
论著
研究方向
页码范围
654-659
页数
6页
分类号
Q78
字数
4385字
语种
中文
DOI
10.3785/j.issn.1008-9292.2013.06.011
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被引次数趋势
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引文网络
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研究主题发展历程
节点文献
低氧诱导因子-1α
遗传载体
内皮细胞
重组,遗传
基因表达
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
浙江大学学报(医学版)
主办单位:
浙江大学
出版周期:
双月刊
ISSN:
1008-9292
CN:
33-1248/R
开本:
大16开
出版地:
杭州市天目山路148号
邮发代号:
32-2
创刊时间:
1958
语种:
chi
出版文献量(篇)
2662
总下载数(次)
3
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