采用酵母表达载体pWX530构建表达人重组牙骨质蛋白1

• 作者: David Wood Xuebin Yang 刘玉 孙卫斌 杨建良 欧伟
• 来源期刊: 口腔生物医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 牙骨质蛋白1 真核表达载体 酵母
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 8-10
• 页数: 3页
• 分类号: Q78
• 字数: 2360字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-8603.2013.01.003

摘要

目的:构建含人重组牙骨质蛋白1(recombination human cementum protein 1,rhCEMP1)基因的真核表达载体,观察其在酿酒酵母细胞中的表达.方法:采用PCR方法扩增rhCEMP1基因,利用定向克隆技术将rhCEMP1基因插入到中间载体pTeasy中,再进一步转插入载体pWX530.重组的pWX530-rhCEMP1在大肠杆菌DH5α中扩增后,通过酶切电泳鉴定和DNA序列测定所构建的质粒.经鉴定正确的表达载体pWX530-rhCEMP1转入酵母感受态细胞中,酵母经氨基酸营养缺陷型筛选后培养表达.利用聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳和酶联免疫吸附测定(ELISA)分析蛋白表达情况,离子交换层析提纯蛋白.结果:构建的重组质粒成功转入酵母细胞,通过SDS-PAGE和ELISA检测rhCEMP1表达成功.结论:成功构建的含rhCEMP1基因的真核表达载体pWX530-rhCEMP1,并能转入酵母细胞中成功表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘玉	南京大学口腔医学院	20	225	6.0	14.0
2	孙卫斌	南京大学口腔医学院	45	160	6.0	10.0
3	欧伟	南京大学口腔医学院	2	2	1.0	1.0
7	杨建良		2	2	1.0	1.0
8	David Wood	利兹大学口腔医学院	2	2	1.0	1.0
9	Xuebin Yang	利兹大学口腔医学院	1	0	0.0	0.0