猪带绦虫TSO45W-4B基因的克隆、表达和抗体制备

• 作者: 刘晖 刘美辰 周必英 周泠 张曦
• 来源期刊: 中国寄生虫学与寄生虫病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 猪带绦虫 TSO45W-4B 表达 纯化 抗体
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 372-375
• 分类号: R383.32
• 语种: 中文

摘要

目的 克隆、表达猪带绦虫TSO45W-4B基因,以重组蛋白TSO45W-4B免疫兔制备抗体.方法 全基因合成猪带绦虫TSO45W-4B抗原编码基因,定向克隆至pGEX-1λT表达载体,构建重组质粒pGEX-TSO45W-4B.转化至大肠埃希菌ArcticExpress(DE3)后,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达情况.表达产物经谷胱甘肽-S-转移酶(GST)亲和层析柱纯化后,免疫新西兰大白兔,制备抗血清.GST亲和层析柱纯化获得血清中抗体后,ELISA测定抗体效价,蛋白质印迹法(Western blotting)鉴定抗体特异性. 结果 酶切和测序结果表明,重组质粒pGEX-TSO45W-4B构建成功.SDS-PAGE结果显示,重组蛋白相对分子质量(Mr)约为40000,经GST亲和层析后可获得纯度为90％以上的重组蛋白.ELISA结果显示,抗体的效价为1∶512000.Western blotting分析结果显示,该抗体能与纯化的重组蛋白发生特异性反应,在约Mr 40000处出现一条带,与预期大小一致. 结论 猪带绦虫TSO45W-4B基因能在大肠埃希菌中表达,制备了TSO45W-4B重组蛋白和兔抗血清.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘晖	遵义医学院寄生虫学教研室	89	374	12.0	14.0
2	张曦	遵义医学院寄生虫学教研室	36	202	9.0	12.0
3	周必英	遵义医学院寄生虫学教研室	59	216	9.0	11.0
4	周泠	遵义医学院附属第一医院中医科	30	196	8.0	13.0
5	刘美辰	遵义医学院寄生虫学教研室	19	89	6.0	9.0