猪带绦虫Ts14-3-3.3蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

• 作者: 周必英 李想 罗波
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 猪带绦虫 Ts14-3-3.3蛋白 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2019,（12）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1100-1105
• 页数: 6页
• 分类号: R383.3
• 字数: 4685字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2019.00.179

摘要

目的 建立猪带绦虫Ts14-3-3.3蛋白原核表达系统并制备兔多克隆抗体.方法 通过逆转录PCR(RT-PCR)技术将猪囊尾蚴总RNA反转录为cDNA,利用特异性引物扩增猪带绦虫Ts14-3-3.3基因,将其克隆至原核表达质粒pCznI中,在大肠杆菌Arctic Express中用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析其表达产物,用HisLink亲和层析柱进行纯化,免疫印迹(Western blot)法鉴定纯化后的Ts14-3-3.3重组蛋白.将纯化的Ts14-3-3.3重组蛋白免疫新西兰兔,制备Ts14-3-3.3多克隆抗体,Western blot和免疫组化法检测Ts14-3-3.3天然蛋白在猪带绦虫成虫和囊尾蚴的分布.结果 成功构建猪带绦虫重组表达质粒pCzn I-Ts14-3-3.3,经IPTG诱导表达,获得可溶性形式高效表达的Ts14-3-3.3重组蛋白,分子质量约29.31 kD,纯化后带有His标签的Ts14-3-3.3重组蛋白能被抗血清所识别.用纯化的Ts14-3-3.3重组蛋白免疫新西兰兔,获得了Ts14-3-3.3多克隆抗体,其效价为1∶512 000.Western blot和免疫组化结果显示,Ts14-3-3.3天然蛋白在猪带绦虫成虫和囊尾蚴中均有表达.结论 成功制备猪带绦虫重组Ts14-3-3.3蛋白,并获得了高纯度、高效价的兔多克隆抗体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周必英	遵义医科大学寄生虫学教研室	6	3	1.0	1.0
2	罗波	遵义医科大学寄生虫学教研室	3	2	1.0	1.0
3	李想	遵义医科大学寄生虫学教研室	4	2	1.0	1.0