肠道病毒71型衣壳蛋白VP1的原核表达和纯化及其抗原性和免疫原性的验证

• 作者: 唐彩华 朱赟 李剑波 罗永能 高孟
• 来源期刊: 国际流行病学传染病学杂志
• 关键词: 肠道病毒感染 衣壳蛋白 原核表达
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 293-298
• 页数: 6页
• 字数: 4042字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1673-4149.2013.05.002

摘要

目的 探究利用大肠埃希菌原核表达系统表达的肠道病毒71型(EV71)衣壳蛋白VP1的抗原性和免疫原性.方法 将EV71 H3-TY株的VP1基因通过PCR扩增,并引入Nde Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位点,定向克隆至pET44a-EV71 VP1表达载体,转化大肠埃希菌BL21(DE3),并用IPTG诱导VP1的表达.然后将表达的重组VP1 (rVP1)经超声、离心和Ni-NTA亲和层析柱纯化并透析复性,用Western免疫印迹法和先前建立的夹心ELISA等方法检测其抗原活性,同时用rVP1免疫兔子并通过测定其诱导的特异性抗体水平来确定其免疫原性.结果 rVP1在大肠埃希菌中主要表达于包涵体中,但能被顺利且有效地纯化和复性.SDS-PAGE显示表达的rVP1相对分子质量约为34 000,与预期大小相符.纯化的rVP1可分别与兔抗EV71多克隆抗体、大鼠抗EV71 VP1单克隆抗体(单抗)和小鼠抗EV71 VP1单抗进行特异性免疫应答.rVP1免疫兔诱导产生的特异性抗体效价高达729 000,高于本底效价,且差异有统计学意义(t=2.646,P＜0.01).结论 EV71 VP1在大肠埃希菌原核表达系统中得以成功表达,纯化的rVP1具有良好的抗原活性和免疫原性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	唐彩华	浙江省医学科学院病毒病研究所	12	32	4.0	5.0
2	高孟	浙江省医学科学院病毒病研究所	19	48	4.0	6.0
3	罗永能	浙江省医学科学院病毒病研究所	17	65	5.0	7.0
4	李剑波	浙江省医学科学院病毒病研究所	8	20	3.0	4.0
5	朱赟	浙江省医学科学院病毒病研究所	5	32	3.0	5.0