基于单标记探针实时荧光定量PCR和熔解曲线分析方法定量检测HBeAg阳性患者前C区变异株

• 作者: 侯伟 刘红艳 吕莹 张咏梅 张瑾 张继明 张轶俊 朱浩翔 毛日成 涂文辉 王瑾瑜 秦艳丽
• 来源期刊: 肝脏
• 关键词: 乙型肝炎病毒 单标记探针 熔解曲线分析 前C区变异 定量检测
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 297-302
• 页数: 6页
• 字数: 4305字
• 语种: 中文

摘要

目的 建立一种HBV复杂前C区变异株精确定量的检测系统.方法 分两步实时PCR完成检测.首先应用野生株阻断探针(WT-blocker probe)进行选择性抑制野生株病毒的扩增,而含量偏低的变异株病毒得以扩增约10 000倍,使其在后续反应中易于检出;第二步应用单标记探针(SimpleProbe)结合熔解曲线分析系统精确定量检测前C区G1896A、G1899A、G1896A/G1899A变异株.通过PBPPO(primer-blocker-probe partial-overlap)设计减少基因多态性对检测的影响,来提高检测精确度.检验结果经直接测序及聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析方法予以证实.结果 4种标准质粒(G1896/G1899、G1896A、G1899A、G1896A/G1899A)能够很好地被检出并予以区分,突变检测灵敏度达到0.01%;10例HBeAg阳性(直接测序法鉴定前C区变异阴性)患者血清标本中,每例至少1种前C区变异株被检出.结论 单标记探针实时荧光定量PCR和熔解曲线分析能够早期灵敏检测前C区变异株,前C区变异株进化过程及机制还需进一步大样本、纵向队列研究予以阐明.