莫氏巴贝斯虫滑动体组件蛋白基因gap45、gap50、myo A和m/c的克隆表达与多克隆抗体制备

• 作者: 任巧云 刘志杰 刘爱红 张浩浩 李安岩 李有全 王锦明 赵帅阳 马米玲
• 来源期刊: 中国农业科学
• 关键词: 巴贝斯虫 RACE 滑动体 克隆 表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2013,（10）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 2175-2182
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2013.10.024

摘要

[目的]克隆和表达莫氏巴贝斯虫滑动体组件蛋白GAP45(gliding associated protein 45,GAP45)、GAP50(gliding associated protein 50,GAP50)、肌球蛋白A(Myosin A,Myo A)和肌球蛋白轻链(myosin light chain,MLC)基因及制备兔源性多克隆抗体.[方法]利用末端快速扩增(rapid-amplification of cDNA ends,RACE)技术从莫氏巴贝斯虫裂殖子cDNA中扩增gap45、gap50、myoA及mlc基因,将获得的全长或基因的部分序列构建pGEX-4T-1原核表达载体,在大肠杆菌BL21 (DE3) pLys中用IPTG诱导表达；融合蛋白经纯化后免疫家兔,制备多克隆抗体,并用ELISA测定抗体的效价及反应性.[结果]获得了gap45、gap50、myoA和mlc基因的全长分别为664、1391、773和2538 bp,开放阅读框长度分别为567、1194、606和2514 bp,制备的多克隆抗体具有较好的特异性,效价高于1∶25600.[结论]克隆了滑动体组件蛋白gap45、gap50、myoA和mlc基因的全长,并制备了多克隆抗体,为筛选巴贝斯虫疫苗和诊断用抗原和药物靶位、研究其生物学入侵机制奠定了基础.