高GC含量DNA模板的PCR扩增

• 作者: 刘体颜 刘刚 戴素琴 曲国龙 王微 谭俊杰 邢玉华 陈惠鹏
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 达托霉素生物合成基因 高GC含量DNA PCR添加剂 touch down PCR
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 645-649
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 3471字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2013.05.011

摘要

目的：：探索高GC含量DNA的PCR扩增条件，为扩增达托霉素生物合成基因簇及拼接奠定基础。方法：在PCR扩增体系中，使用高保真的聚合酶及添加不同浓度的DMSO、7-deaza-dGTP等增强剂，并选择合适的PCR循环程序，优化富含GC的DNA的PCR扩增条件。结果：向反应体系中额外添加1%~4%的DMSO可以显著提高富含GC的DNA的PCR扩增产物量，但会降低其特异性；7-deaza-dGTP可以提高扩增产物的特异性及保真度，但产量会有所下降。应用touch down PCR并在体系中添加7-deaza-dGTP能够提高扩增产物的特异性和产率，增加扩增的保真度。结论：应用优化的PCR扩增条件将所有达托霉素生物合成基因簇分段扩增出来，并可扩增出长达6 kb的片段，且序列完全正确，可以进行后续拼接。