靶向人Ⅰ型胶原蛋白α1链分子的shRNA真核表达载体的构建与鉴定

• 作者: 余海浪 周珏宇 孟伟 郑文岭 马文丽
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 乳腺癌 Ⅰ型胶原蛋白α1链 短发夹RNA 真核表达载体
• 年，卷（期）: 2013,（10）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1032-1035
• 分类号: Q786|R392-33
• 语种: 中文

摘要

目的 构建靶向人Ⅰ型胶原蛋白α1链(COL1A1)分子的shRNA真核表达载体并检测其对靶分子的干扰效应.方法根据靶分子COL1A1基因序列,设计、合成编码其shRNA的互补寡核苷酸序列,克隆至线性化的pSilencerTM2.1-U6 neo载体中并对重组质粒进行酶切分析及测序鉴定；脂质体介导重组质粒转染乳腺癌MDA-MB-231细胞,经G418筛选获稳定表达细胞株,RT-PCR及Western blot法检测其对靶分子COL1A1表达的影响.结果 酶切及DNA测序证实重组质粒pshRNA-COL1A1序列正确.与对照组比较,重组表达质粒pshRNA-COL1A1-1和pshRNA-COL1A1-2在mRNA和蛋白水平均能显著抑制COL1A1基因的表达(P＜0.05),抑制率分别为(44.41％±3.90％,63.05％±3.13％)及(45.50％±2.71％,66.98％±2.08％).结论 成功构建靶向人乳腺癌MDA-MB-231细胞COL1 A1基因的shRNA真核表达载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	马文丽	南方医科大学基因工程研究所	275	1255	15.0	23.0
2	郑文岭		94	308	8.0	12.0
3	孟伟	南方医科大学基因工程研究所	26	109	5.0	8.0
4	周珏宇	南方医科大学基因工程研究所	29	102	6.0	8.0
5	余海浪	南方医科大学基因工程研究所	14	54	3.0	7.0