Bcl-xL的基因克隆及其原核表达体系构建

• 作者: 吴伟伟 时振华 杜鸿 赵健
• 来源期刊: 临床输血与检验
• 学科: 医学
• 关键词: Bcl-xL cDNA克隆 RT-PCR 原核表达
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 336-339
• 页数: 4页
• 分类号: R392.11
• 字数: 3245字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-2587.2013.04.010

摘要

目的 克隆人Bcl-xL基因全长编码区,并利用载体pet28a在大肠埃希菌(ROS)原核表达人Bcl-xL蛋白,为探讨Bcl-xL与肿瘤的关系奠定基础.方法 分离胃癌患者外周血单核细胞并提取总RNA;采用RT-PCR方法扩增Bel-xL基因,构建重组表达质粒pet28a/Bcl-xL；酶切鉴定挑选阳性重组质粒转化大肠埃希菌ROS,测序鉴定后增菌培养,IPTG 25℃诱导6h,SDS-PAGE电泳判断以包涵体形式存在的带有His标签的融合蛋白,进一步利用免疫印迹法鉴定.结果 成功扩增获得Bcl-xL基因CDS区全长702 bp,与GenBank中发表的序列完全一致；成功构建了原核表达载体pet28a/Bcl-xL,并在工程菌ROS中获得大量表达.结论 扩增获得人Bcl-xL基因,并成功原核表达获得人Bcl-xL融合蛋白,为进一步深入研究其生物学功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杜鸿	苏州大学附属第二医院检验科	51	186	8.0	11.0
2	赵健	江苏省苏州市第七人民医院检验科	12	53	1.0	7.0
3	时振华	江苏省苏州市第七人民医院检验科	1	0	0.0	0.0
4	吴伟伟	江苏省苏州市第七人民医院检验科	1	0	0.0	0.0