稳定表达人SidT2基因细胞系的建立及其dsRNA转运功能的研究

• 作者: 任瑞文 刘建伟 唐博恒 张培 张新军 洪文艳
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: SidT2基因 真核表达 BHK细胞系 MDCK细胞系 细胞转运 双链RNA
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 493-496
• 页数: 4页
• 分类号: Q78|Q24
• 字数: 3216字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2013.04.011

摘要

目的：构建稳定表达人SidT2基因的BHK及MDCK细胞系，探讨SidT2基因过表达与细胞转运双链RNA （dsRNA）能力的关系。方法：根据人SidT2基因序列设计引物，克隆其编码区序列，经双酶切后与pEGFP-N3载体连接，构建其真核表达载体，分别瞬时转染BHK及MDCK细胞，并使用G418筛选稳定表达细胞系；在此基础上，体外转录合成绿色荧光蛋白（GFP）dsRNA，以GFP基因为报告基因，进一步分析过表达人SidT2基因对BHK及MDCK细胞转运dsRNA能力的影响。结果：经基因克隆、酶切、连接后，构建了人SidT2基因真核表达载体pEGFP-SidT2；经瞬时转染及G418筛选，获得稳定过表达人SidT2基因的BHK及MDCK细胞系，实时荧光定量RT-PCR分析表明，其SidT2基因转录水平分别提高71、64.5倍；稳定表达SidT2基因后，在培养液中添加GFP dsRNA，GFP荧光强度较对照细胞分别降低88.1%、73.7%，表明稳定表达SidT2基因的BHK、MDCK细胞转运dsRNA的能力显著增强。结论：构建了稳定表达人SidT2基因的BHK及MDCK细胞系，SidT2基因过表达可显著提高外源性dsRNA的转运能力。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	任瑞文		39	115	6.0	7.0
2	洪文艳		33	91	5.0	7.0
3	唐博恒		49	109	6.0	8.0
4	刘建伟		69	269	8.0	13.0
5	张培		14	18	3.0	3.0
6	张新军		3	2	1.0	1.0