绿僵菌Argonaute基因片段原核表达载体的构建及其表达

• 作者: 周权 孟慧敏 汪章勋
• 来源期刊: 安徽科技学院学报
• 学科: 农学
• 关键词: 绿僵菌 Argonaute基因 原核表达
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 所属期刊栏目: 生命科学
• 页码范围: 39-43
• 页数: 5页
• 分类号: S476+.12
• 字数: 2885字
• 语种: 中文

摘要

绿僵菌是一类广泛应用于生物防治的昆虫病原真菌.研究表明小RNA能够调控基因的表达,其中Argonaute基因在整个小RNA通路中发挥重要的作用.本研究通过RT-PCR的方法从绿僵菌中获得了Argonaute基因的部分功能片段,构建了其重组原核表达载体,将重组载体转化至大肠杆菌进行诱导表达;采用镍柱亲和纯化重组的目的蛋白并通过Western blot技术鉴定.结果发现:通过RT-PCR的方法获得长度约为950bp的基因片段;重组原核表达载体经诱导表达后,SDS-PAGE检测发现分子量约为34kDa的目的蛋白条带;诱导5h后蛋白的表达量最高,采用镍柱亲和层析纯化重组蛋白,经Western blot技术检测,重组蛋白可与His-tag抗体发生特异性反应.该纯化重组蛋白的获得为将来绿僵菌Argonaute蛋白抗体的制备,并进一步通过该抗体获得绿僵菌体内的小RNA及其靶基因提供了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	汪章勋	安徽农业大学植物保护学院	16	99	5.0	9.0
5	周权	安徽农业大学微生物防治省重点实验室	10	79	4.0	8.0
6	孟慧敏	安徽农业大学微生物防治省重点实验室	6	11	2.0	3.0