人p21活化激酶6基因截短区域的GST标签原核表达质粒的构建及其重组蛋白的表达

• 作者: 刘彤 李丰 李丹妮 李洋 耿楠希
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: P21活化激酶 截短区域 原核表达质粒 GST融合蛋白
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 437-440
• 页数: 4页
• 分类号: R736
• 字数: 2627字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7694/jldxyxb20130303

摘要

目的:构建人p21活化激酶6(PAK6)的各个截短区域原核表达质粒,并诱导和鉴定其融合蛋白的表达,为探讨PAK6基因的生物学功能提供依据.方法:以真核表达质粒pcDNA3.1-GFP-PAK6为模板,PCR扩增出PAK6基因的各个截短片段.所获得的各截短片段经EcoR Ⅰ/Xho Ⅰ双酶切后克隆至GST标签的原核表达载体pGEX-5X-1中.将构建的PAK6各截短质粒转化入Ecoli BL21中,采用IPTG诱导PAK6基因截短融合蛋白表达,采用Western blotting法鉴定PAK6基因截短融合蛋白的表达.结果:EcoR Ⅰ/Xho Ⅰ双酶切后得到与预期大小相符的载体片段(5 000 bp)和PAK6 1-55(165 bp)、PAK6 56-210(465 bp)、PAK6 211-410(600 bp)及PAK6 385-681(891 bp)4个片段.Western blotting检测,PAK6各截短区域质粒GST-PAK6截短融合蛋白相对分子质量分别为32 000、43 000、48 000和60 000.结论:成功构建PAK6基因各个截短区域GST标签原核表达质粒并表达其重组蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘彤	中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室	27	172	7.0	12.0
2	李丰		26	92	4.0	9.0
3	李洋	中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室	21	118	5.0	10.0
4	李丹妮	中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室	15	10	2.0	3.0
5	耿楠希	中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室	1	0	0.0	0.0