单链抗体2F5和4E10的原核表达、纯化和鉴定

• 作者: 刘秀侠 杨雄 陈红英
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: HIV-1 gp41 MPER 2F5 4E10 单链抗体
• 年，卷（期）: 2013,（10）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 177-183
• 语种: 中文

摘要

为深入研究2F5和4E10抗体,构建了特异性识别HIV-1病毒MPER区域的2F5和4E10单链抗体的重组质粒,进行了融合蛋白的表达、纯化及鉴定.利用重叠PCR扩增及基因重组技术,获得2F5-scFv和4E10-scFv基因,将其插入原核表达载体pET-28a(+)上,获得表达质粒.转入大肠杆菌BL21(DE3)及Rosetta-gami2(DE3) pLysS中,IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测发现,2F5-scFv和4E10-scFv在两种表达菌中均以包涵体形式存在,重组蛋白分子量分别约为27 kD、29 kD.变性条件下,利用镍离子螯合层析方法对包涵体蛋白进行纯化,经复性后获得可溶性单链抗体.ELISA检测表明,制备的单链抗体与原核和真核表达的MPER抗原都有特异性结合活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨雄	西北农林科技大学生命科学学院	3	7	2.0	2.0
2	陈红英	西北农林科技大学生命科学学院	9	14	2.0	3.0
3	刘秀侠	西北农林科技大学生命科学学院	2	3	1.0	1.0