海参蛋白酶体的提取及其酶学性质研究

• 作者: 侯红漫 孙黎明 张公亮 张蕊 李冉 李秀芬 牛海玲
• 来源期刊: 中国食品学报
• 关键词: 海参 蛋白酶体 纯化 酶学性质
• 年，卷（期）: 2013,（12）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 65-70
• 语种: 中文

摘要

目的:从海参体壁组织中分离提取蛋白酶体,研究其酶学性质.方法:新鲜海参组织经匀浆、ris-HCl缓冲液浸提后得到粗提物,再经(NH4)2SO4盐析、二乙氨乙基葡聚糖纤维素和丙烯葡聚糖凝胶S-300分离纯化后得到海参蛋白酶体.经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,其分子质量200 ku.结果:海参蛋白酶体特异性最强的检测底物Boc-GAA-MCA,最适pH 8.0,最适反应温度45℃.40℃时蛋白酶体活性稳定,在lh的孵育过程中呈现一定的热激活效应.在50～60℃,酶活力随孵育时间的延长迅速下降.K+、Ca2、M矿、Zn2+均可明显抑制其活性.抗痛素、N-甲苯磺酰-L-赖氨酸氯甲基化酮、N-甲苯磺基-L-苯乙胺酰氯甲基酮及E-64均可显著抑制该蛋白酶体活性.结论:海参体壁蛋白酶体具有典型的蛋白酶体的复合型活性,其中胰蛋白酶样活性较强,之后是糜蛋白酶样活性,而肽基谷氨酰肽水解酶样活性最弱.