人miR-152基因的慢病毒载体的构建及稳定株筛选

• 作者: 傅君芬 冯跃英 史春梅 季晨博 林胡 许晓琴 郭锡熔
• 来源期刊: 临床检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: miR-152 慢病毒载体 HepG2细胞
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 基础实验诊断研究
• 页码范围: 20-23
• 页数: 4页
• 分类号: R34
• 字数: 4165字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建人miR-152基因重组慢病毒载体并筛选稳定表达株.方法 PCR扩增包括miR-152前体所在区域的基因组DNA,克隆到慢病毒栽体表达质粒pGIPZ中,得到重组的pGIPZ-miR-152表达载体,通过与包装质粒共转染HEK-293T细胞,获得携带miR-152 minigene的重组慢病毒.用病毒感染HepG2细胞,72 h后用嘌呤霉素筛选.用real-time PCR法检测miR-152基因的表达.结果 构建的重组质粒经双酶切验证和测序比对鉴定正确；该质粒转染293T细胞获取的慢病毒滴度达7.5×107TU/mL;用病毒感染HepG2细胞,感染效率达70％以上.药物筛选10 d后,获得的过表达株miR-152表达量比正常细胞高近10倍.结论 成功构建人miR-152基因慢病毒栽体质粒pGIPZ-miR-152,并筛选出miR-152过表达细胞株,为后续实验奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	傅君芬	浙江大学附属儿童医院内分泌科	73	664	13.0	22.0
2	郭锡熔	南京医科大学附属南京妇幼保健院儿童保健科	220	1261	16.0	21.0
3	史春梅	南京医科大学附属南京妇幼保健院儿童保健科	12	50	4.0	6.0
4	季晨博	南京医科大学附属南京妇幼保健院儿童保健科	19	46	4.0	5.0
5	林胡	浙江大学附属儿童医院内分泌科	7	15	2.0	3.0
6	许晓琴	浙江大学附属儿童医院内分泌科	2	1	1.0	1.0
7	冯跃英	浙江大学附属儿童医院内分泌科	3	4	2.0	2.0