大豆GmNAC8基因克隆与原核表达

• 作者: 何晓兰 刘晓庆 张大勇 徐照龙 许玲 马鸿翔 黄益洪
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: GmNAC8 基因克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 遗传育种·耕作栽培·生理生化
• 页码范围: 734-737
• 页数: 4页
• 分类号: S565.1
• 字数: 2971字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2013.04.007

摘要

为了进一步明确GmNAC8基因的功能,设计带有NdeⅠ和XbaⅠ双酶切位点引物,从大豆根系cDNA中克隆到GmNAC8基因全长ORF(Open reading frame),编码蛋白质分子质量为37 000,理论等电点为6.43.将扩增片段克隆至原核表达载体pCZN1,构建重组质粒pCZN1-GmNAC8,经过酶切和PCR验证,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,0.2 mmol/L IPTG诱导后,经SDS-PAGE电泳检测获得了目的蛋白质,该蛋白质主要以包涵体的形式存在,通过镍柱子纯化获得纯化蛋白质,然后利用His标签蛋白质作为抗体进行Western-blot分析,证明所纯化蛋白质为目的蛋白质.