和田羊Myostatin蛋白成熟肽的基因克隆及原核表达

• 作者: 姜仁军 李树伟 邓芳
• 来源期刊: 黑龙江畜牧兽医（上半月）
• 学科: 生物学
• 关键词: 绵羊 肌肉生长抑制素(Myostatin)蛋白成熟肽 克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 所属期刊栏目: 畜牧科学
• 页码范围: 42-46
• 页数: 5页
• 分类号: Q343.1
• 语种: 中文

摘要

为了克隆和田羊肌肉生长抑制素(Myostatin)蛋白成熟肽编码基因片段,并对其进行原核表达,试验根据绵羊Myostatin蛋白成熟肽基因序列从GenBank(登录号为NM_001009428)中设计并合成1对引物.以塔里木大学动物基因工程实验室构建的和田羊Myostatin基因全序列的克隆载体为模板,采用PCR方法特异性扩增和田羊Myostatin蛋白成熟肽基因片段；将其克隆到pMD18-T载体中,构建克隆质粒pMD18-T-Ms；经PCR和双酶切分析鉴定,将阳性克隆送上海生工生物工程技术服务有限公司测序验证；测序验证后双酶切pMD18-T-Ms克隆质粒和pET-28a(+)表达质粒,进一步构建pET-28a(+)-Ms重组表达质粒.将重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导后表达Myostatin蛋白成熟肽,通过SDS-PAGE电泳分析鉴定表达的重组蛋白.结果表明:PCR特异性扩增出1条长度约为330 bp的条带；序列测定分析显示和田羊Myostatin蛋白成熟肽基因片段长327 bp,与GenBank上绵羊Myostatin蛋白成熟肽编码基因从799～1 125 bp片段的核苷酸同源性为100％,所表达的Myostatin蛋白成熟肽分子质量约为14.7 ku.试验成功克隆和田羊Myostatin蛋白成熟肽编码基因片段,构建了其克隆质粒pMD18-T-Ms和重组表达质粒pET-28a(+)-Ms,并在大肠杆菌中获得有效表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姜仁军		12	34	4.0	5.0
2	邓芳		11	13	2.0	3.0
3	李树伟		23	50	4.0	7.0