小鼠pcDNA3.1/CXCL14真核表达载体的构建、表达及意义

• 作者: 张黎军 李芳芳 杨帆 蒋小波
• 来源期刊: 医学研究杂志
• 关键词: CXCL14 真核表达载体 293T细胞 胰岛素抵抗
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 82-86
• 页数: 5页
• 字数: 4263字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建小鼠pcDNA3.1/CXCL14真核表达载体,观察其在293T细胞中的表达,为进一步探讨CXCL14对脂肪细胞因子、氧化应激及胰岛素信号转导通路的影响提供工具.方法 从C57/BL胚鼠肝脏组织中抽提RNA,RT-PCR扩增CX-CL14基因片段,并将其插入pcDNA3.1进行测序,鉴定正确构建pcDNA3.1/CXCL14后转染293T细胞,用RT-PCR法和Western blot法分别从mRNA水平和蛋白质水平分别检测CXCL14的表达情况.结果 重构质粒经PCR、限制性核酸内切酶Nhe Ⅰ和Xho Ⅰ酶切以及DNA序列分析鉴定,表明真核表达载体构建正确;以脂质体法转染293T细胞后,RT-PCR、Western blot能检测到目的蛋白表达.结论 成功构建了小鼠pcDNA3.1/CXCL14真核表达载体并能在真核细胞中进行表达.