利用RNAi技术抑制籽粒PPO合成改良小麦面粉白度的研究

• 作者: LIU Qing 孙重霞 张婷 张晓东 李保云 杨凤萍 梁荣奇 隋晓燕
• 来源期刊: 中国农业科学
• 关键词: 小麦 多酚氧化酶(PPO) RNAi 白度
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·分子遗传学
• 页码范围: 1104-1113
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2013.06.003

摘要

[目的]通过RNAi策略抑制小麦籽粒ppo的表达,获得籽粒PPO酶活性低、白度高的转基因小麦新种质.[方法]构建了以小麦胚乳特异表达启动子1Dx5启动子驱动的籽粒ppo的RNAi载体pBAC47P-ppoIR,利用基因枪将该载体与含bar的表达载体基因枪共转化中优9507幼胚愈伤组织,获得T0转基因植株.通过分子鉴定(PCR、Southern杂交、半定量RT-PCR、Northern杂交)、酶活筛选和白度测定等方法对转基因植株及其后代株系进行筛选.[结果]获得了27株阳性T0转基因植株.转基因植株及其后代经PCR和Southern杂交检测表明,RNAi构件已经稳定整合到T1的12个株系中.半定量RT-PCR和Northern杂交结果表明有20株T2籽粒中ppo表达水平明显低于对照.对转基因T2灌浆期籽粒进行PPO同功酶活性分析表明,有6个株系的PPO活性有所减弱.对T4籽粒的面片白度测定表明,5个株系的白度均比对照有所提高,其中2个株系效果显著.[结论]RNAi技术的表达能抑制籽粒ppo表达,降低PPO同功酶的活性,明显提高小麦面片白度,从而为小麦面粉白度的改良、品质育种提供了材料.