羽衣甘蓝泛素结合酶ubc7基因分离、原核表达及纯化

• 作者: 李晓屿 李玉花 杨佳 王艳红 蓝兴国
• 来源期刊: 中国农学通报
• 学科: 农学
• 关键词: 羽衣甘蓝 泛素结合酶 Ubc7 原核表达
• 年，卷（期）: 2013,（34）
• 所属期刊栏目: 园艺——研究报告
• 页码范围: 76-80
• 分类号: S635.9
• 语种: 中文

摘要

为分离羽衣甘蓝(Brassica oleracea var.acephala)自交不亲和系(S1-b3S13-b)泛素结合酶7(ubc7)基因,探讨Ubc7重组蛋白的原核表达及纯化.利用CTAB的方法提取羽衣甘蓝柱头总RNA,通过RT-PCR的方法分离ubc7基因,将编码ubc7基因的cDNA序列亚克隆到pET-14b原核表达载体中,将阳性重组表达质粒转化到大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)pLysS中,利用IPTG进行诱导表达,并通过Ni2+-NTA树脂进行亲和层析的方法纯化重组蛋白.结果表明,获得的Boubc7含有一个长度为501 bp的开放读码框,编码一个含有166个氨基酸残基的蛋白质.预测BoUbc7的相对分子质量约为18.7 kDa,理论等电点QI)为5.35.利用IPTG诱导的细菌蛋白中,SDS-PAGE显示出在分子量大小23 kDa处有蛋白特异性的表达,这与预测的His6融合的BoUbc7蛋白分子量相符;利用Ni2+-NTA树脂进行亲和层析纯化后,成功获得了BoUbc7融合蛋白.该试验分离了羽衣甘蓝ubc7基因,并通过原核表达系统获得了BoUbc7重组蛋白,为进一步分析其生物学功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李玉花	东北林业大学生命科学学院	168	1627	23.0	33.0
2	王艳红	东北林业大学生命科学学院	7	6	2.0	2.0
3	蓝兴国	东北林业大学生命科学学院	35	138	5.0	10.0
4	李晓屿	东北林业大学生命科学学院	12	10	2.0	2.0
5	杨佳	东北林业大学生命科学学院	12	33	4.0	5.0