铁蛋白轻链真核表达载体的构建

• 作者: 张永泽 张洁 柳彩芝 樊玉梅 段相林
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 铁蛋白轻链 RAW264.7 pcDNA3 分子克隆 免疫印迹
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 4-7
• 页数: 4页
• 分类号: Q784
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-311X.2014.01.0002

摘要

目的:为进一步研究铁蛋白轻链(ferritin light chain,FTL)的表达对细胞内信号转导途径的影响提供平台.方法:利用PCR扩增技术得到小鼠552 bp的FTL基因编码序列,并在基因的C端引入Flag标签,将此序列插入到真核表达载体pcDNA3多克隆位点区域中限制性内切酶HindⅢ和BamH Ⅰ之间,得到带有Flag标签的FTL基因的真核表达载体pcDNA3-FTL-Flag.分别经酶切和测序鉴定.用脂质体lipofectamineTM 2000将构建成功的pcDNA3-FTL-Flag及其对照空载体pcDNA3分别转染到RAW264.7细胞中,提取蛋白后利用Western blot方法检测细胞中带有Flag标签的FTL蛋白表达.结果:重组质粒酶切鉴定得到预期片段,测序结果显示所构建的小鼠FTL基因的cDNA序列正确,并在细胞内检测到分子量约为21kDa的蛋白的强烈表达信号.结论:实验成功构建小鼠FTL基因的真核表达载体pcDNA3-FTL-Flag.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	段相林		121	1113	18.0	26.0
2	樊玉梅		14	42	4.0	6.0
3	张洁		28	68	5.0	7.0
4	张永泽		1	0	0.0	0.0
5	柳彩芝		2	0	0.0	0.0