青虾血蓝蛋白基因的克隆、表达分析及多克隆抗体的制备

• 作者: 乔慧 傅洪拓 孙盛明 张世勇 戈贤平 朱健
• 来源期刊: 中国水产科学
• 学科: 农学
• 关键词: 青虾 血蓝蛋白 基因克隆 低氧胁迫 复氧刺激 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 235-243
• 页数: 9页
• 分类号: S941
• 字数: 6201字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1118.2014.00235

摘要

应用RACE技术克隆了青虾(Macrobrachium nipponense)的Hc基因全长cDNA序列,并对该基因序列特征进行了分析。青虾Hc基因cDNA全长2235 bp,包括10 bp的5′末端非翻译区(UTR),2074 bp的开放阅读框(ORF),151 bp的3′UTR,开放阅读框编码688个氨基酸。蛋白相似度比对显示,青虾血蓝蛋白含有典型的6个保守的铜离子结合位点。系统进化树分析表明,青虾Hc与脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda) Hc聚在一起,具有最近的亲缘关系。荧光定量PCR检测显示, Hc基因在青虾不同组织中均有表达,其表达量在肝胰腺中最高；使用荧光定量PCR检测青虾Hc基因在低氧胁迫和复氧条件下在肝胰腺中的mRNA时空表达情况,结果显示,经低氧和复氧刺激后,与对照组相比, Hc 在肝胰腺中的表达量分别在低氧胁迫12 h、24 h 和复氧6 h出现了3次明显上调,由此推测Hc基因参与低氧应激分子过程。此外,本研究通过血蓝蛋白的分离纯化技术制备了多克隆抗体,本研究结果可为更进一步的了解青虾血蓝蛋白的生理功能提供理论支撑。