靶向G偶联蛋白受体87基因shRNA重组表达质粒的构建及鉴定

• 作者: 冯文莉 李亚娟 李会 王方 钟梁 鲁力文
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: G偶联蛋白受体 RNA干扰 膀胱癌
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 42-45
• 分类号: Q782
• 语种: 中文

摘要

目的 构建靶向G偶联蛋白受体(G protein-coupled receptor,GPR)87基因的shRNA重组表达质粒,并进行鉴定.方法 根据NCBI基因数据库中的GPR87基因mRNA序列设计并合成3对靶向GPR87基因的shRNA,同时设阴性对照GPR87-HK序列,分别与线性化质粒pGenesil-.1连接,构建靶向GPR87基因的shRNA重组表达质粒GPR87-1、GPR87-2、GPR87-3及GPR87-HK,在Lipofectamine 2000介导下,分别转染BIU87膀胱癌细胞,通过RTPCR和Western blot法检测各组细胞中GPR87基因mRNA转录和蛋白表达水平,并计算表达抑制率.结果 3种重组质粒经单酶切及测序鉴定,证明构建正确;转染BIU87膀胱癌细胞48 h后,镜下观察均可见绿色荧光;GPR87-1组、GPR87-2组和GPR87-3组细胞中GPR87基因和蛋白表达水平均显著低于GPR87-HK组(P＜0.01),mRNA表达抑制率分别为76％、52％和50％,蛋白表达抑制率分别为90％、45％和41％.结论 成功构建了靶向GPR87基因的shRNA重组表达质粒,为后续研究GPR87基因对膀胱癌细胞的增殖、凋亡及耐药的影响奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	钟梁	重庆医科大学临床血液学教研室临床检验诊断学教育部重点实验室	24	100	5.0	8.0
2	王方	重庆医科大学临床血液学教研室临床检验诊断学教育部重点实验室	4	3	1.0	1.0
3	李会	重庆医科大学临床血液学教研室临床检验诊断学教育部重点实验室	16	205	4.0	14.0
4	李亚娟	重庆医科大学临床血液学教研室临床检验诊断学教育部重点实验室	2	0	0.0	0.0
5	鲁力文	重庆医科大学临床血液学教研室临床检验诊断学教育部重点实验室	1	0	0.0	0.0