链霉亲和素-自噬相关基因融合蛋白的原核表达及纯化

• 作者: 刁艳君 刘家云 张志平 苏明权 郝晓柯 马越云
• 来源期刊: 标记免疫分析与临床
• 关键词: 自噬相关基因 链霉亲和素 融合蛋白 原核表达 前列腺癌 基因重组技术 蛋白质免疫印迹技术 PCR
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 180-183
• 页数: 4页
• 字数: 2792字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11748/bjmy.issn.1006-1703.2014.02.022

摘要

目的 构建链霉亲和素(streptavidin,SA)和自噬相关基因(Beclin 1)重组质粒,并对融合蛋白SA-Beclin 1进行表达和纯化.方法 利用基因重组技术将核心SA与Beclin 1序列连接,克隆人pQE80形成pQE80-SA-Beclin 1重组载体,IPTG诱导融合蛋白原核表达,镍亲和凝胶层析柱纯化融合蛋白,Western blot鉴定.结果 PCR成功扩增核心SA活性中心,酶切鉴定和测序均证实重组载体pQE80-SA-Beclin 1构建成功;IPTG诱导后SA-Beclin 1融合蛋白(含His标签)在大肠杆菌中高效表达,SDS-PAGE分析表达的融合蛋白以包涵体为主,经镍亲和凝胶层析柱纯化得到融合蛋白,Western blot鉴定其相对分子量约为72000kD,与预期相符.结论 本文成功构建了重组质粒并表达纯化了SA-Beclin 1融合蛋白,为进一步研究SA-Beclin 1的功能及临床应用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郝晓柯	第四军医大学附属西京医院全军临床检验医学研究所	322	1751	18.0	23.0
2	张志平	第四军医大学附属西京医院全军临床检验医学研究所	7	50	4.0	7.0
3	马越云	第四军医大学附属西京医院全军临床检验医学研究所	112	451	11.0	15.0
4	苏明权	第四军医大学附属西京医院全军临床检验医学研究所	226	1052	14.0	20.0
5	刘家云	第四军医大学附属西京医院全军临床检验医学研究所	117	731	14.0	20.0
6	刁艳君	第四军医大学附属西京医院全军临床检验医学研究所	5	7	2.0	2.0