O型口蹄疫病毒核酸检测标准样品的制备

• 作者: 凌宗帅 孙涛 曹丙蕾 梁成珠 王群 邓明俊 郑小龙 雷质文
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 定值 O型口蹄疫病毒 实时定量RT-PCR 标准样品
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 45-50
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.6
• 字数: 4468字
• 语种: 中文

摘要

利用基因克隆和体外转录技术制备O型口蹄疫病毒(FMDV)核酸检测标准样品.设计O型FMDV 3D基因的全长开放阅读框的克隆引物,RT-PCR获得相应片段,连接至PGEM-T载体,测序后采用体外转录方法制备RNA纯品,初步定量稀释后,混合分装作为核酸标准样品候选物.采用实时荧光定量RT-PCR方法进行均匀性和稳定性检验,并委托外部实验室采用外标实时定量RT-PCR方法对转录的RNA片段进行定值.通过绘制荧光定量标准扩增曲线计算标准物质含量(拷贝数),并根据委托单位的定值结果进行不确定度的估算.均一性结果显示瓶间差异小于5％,稳定试验表明室温20℃～25℃(相对湿度20％～50％)14 d,2℃～8℃3个月及-20℃保存1年的含量均无明显变化.核酸标准物质定值为(1.260士0.485)×108 copies,可用作O型FMDV通用核酸检测的标准质控品.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	梁成珠		84	406	10.0	15.0
2	凌宗帅		27	132	8.0	9.0
3	雷质文		34	164	7.0	11.0
4	郑小龙		45	148	8.0	9.0
5	王群		31	76	4.0	7.0
6	孙涛		42	116	7.0	8.0
7	邓明俊		36	144	8.0	10.0
8	曹丙蕾		9	21	3.0	4.0