肿瘤相关蛋白spindlin 1的表达、纯化及多克隆抗体的制备

• 作者: 南雪 吕洋 岳文 张鹏 曾泉 王静雪 秦立篷 裴雪涛 陈琳
• 来源期刊: 中国药理学与毒理学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: spindlin 1 蛋白质生物合成 多克隆抗体 卵巢肿瘤
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 321-328
• 页数: 8页
• 分类号: R392.11
• 字数: 1186字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3867/j.issn.1000-3002.2014.03.002

摘要

目的：制备spindlin 1蛋白的多克隆抗体，为spindlin 1的功能研究和肿瘤筛查奠定基础。方法spindlin 1-谷胱甘肽S转移酶融合蛋白（spindlin 1-GST）在大肠杆菌中表达，切除 GST 后，将纯化的spindlin 1蛋白免疫家兔，制备多克隆抗体。Hitrap Protein A柱纯化spindlin 1抗血清，ELISA测定抗体效价。用Western蛋白质印迹法和免疫组化方法检测抗体的特异性。结果 ELISA检测结果表明，纯化的spindlin 1多克隆抗体效价为1∶2000。Western 蛋白质印迹法实验结果表明，纯化的spindlin 1多克隆抗体能够与转染pAdeasy-myc-spindlin 1载体的HeLa细胞抽提物中spindlin 1蛋白结合，与Myc抗体检测位置一致。免疫组化结果表明，转染增强型绿色荧蛋白（EGFP）和spindlin 1（pEGFP-C3-spindlin 1）的 HeLa细胞发绿色荧光，其细胞核中有spindlin 1蛋白表达。且spindlin 1多克隆抗体能够特异性识别卵巢癌组织中的spindlin 1蛋白。结论成功制备肿瘤相关蛋白spindlin 1的多克隆抗体，能够特异性检测细胞和组织中spindlin 1蛋白表达。