CHO细胞表达的抗炭疽保护性抗原人源化抗体的纯化及质量控制分析

• 作者: 于长明 付玲 任军 侯利华 宋晓红 张章 张金龙 李冰 李建民 杨秀旭
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 炭疽 保护性抗原 人源化抗体 纯化 质量控制
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 817-820
• 页数: 4页
• 分类号: Q503
• 字数: 2869字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2014.06.015

摘要

目的：建立CHO细胞表达的抗炭疽保护性抗原人源化单抗纯化工艺和质量控制方法。方法：收获50 L生物反应器中无血清悬浮培养的CHO工程细胞培养液，通过高速离心去除细胞及碎片后超滤浓缩上清液，经亲和层析、SPFF阳离子交换层析后，将所得目的蛋白质经G25凝胶柱更换缓冲液以完成纯化；对纯化的产品进行单抗鉴别（Western印迹）、相对分子质量（SDS-PAGE和MOLDI-TOF）、纯度（SEC-HPLC）、生物学活性（毒素中和试验）、产品相关杂质（SEC-HPLC检测聚集体、降解产物）、工艺相关杂质（ELISA分析残余宿主蛋白、残余蛋白A）、安全性（凝胶法检测内毒素、薄膜过滤法考察无菌）分析。结果：样品回收率达61.7%；单抗鉴别实验阳性；MOLDI-TOF测定完整分子的相对分子质量为147995，与预期相符；单体比例为99.25%，二聚体比例为0.75%；EC50值为0.1516μg/mL。残余宿主蛋白、残余蛋白A、内毒素、无菌检查结果符合药典要求。结论：初步建立了纯化工艺和质量控制方法，为抗炭疽人源化单抗药物的研制奠定了基础。