人VHL基因真核表达载体的构建及其对肿瘤细胞生长的抑制

• 作者: 冀全博 冯滢滢 叶棋浓 周丽英 张立 徐小洁 李玲 梁迎春 王婷 郭靖
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 人VHL基因 克隆 真核表达 肿瘤细胞
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 775-778
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 2573字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2014.06.005

摘要

目的：构建人抑癌基因VHL的真核表达载体，并验证其对肿瘤细胞生长的影响。方法：采用PCR技术从人乳腺文库中扩增人VHL基因，将其克隆到pXJ-40-myc载体中，酶切和测序验证后转染人胚肾293T细胞，通过蛋白免疫印迹鉴定其表达；转染人乳腺癌ZR75-1细胞和肝癌HepG2细胞，通过CCK8法测定细胞生长曲线。结果：从人乳腺文库中扩增得到约650 bp的DNA片段，并克隆至pXJ-40-myc载体上，且测序与目的序列完全一致；转染人胚肾293T细胞后，蛋白免疫印迹检测到相对分子质量为26×103的目的基因表达产物；细胞生长曲线显示，转染myc-VHL的乳腺癌、肝癌细胞较空载体细胞生长慢。结论：构建了myc-VHL真核表达载体，myc-VHL抑制癌细胞生长，为进一步研究VHL在肿瘤发生发展中的功能奠定了基础。