传染性胰坏死病毒双抗体夹心 ELISA检测方法的建立

• 作者: 乔薪瑗 刘敏 唐丽杰 姜艳萍 崔文 张琳琳 张英 李一经 蒋烨 连科迅
• 来源期刊: 淡水渔业
• 学科: 农学
• 关键词: 传染性胰坏死病毒 双抗体夹心ELISA检测方法 单克隆抗体 兔抗血清
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 57-62,72
• 页数: 7页
• 分类号: S941.41
• 字数: 4712字
• 语种: 中文

摘要

以纯化的兔抗传染性胰坏死病病毒（ IPNV） VP2重组蛋白多克隆抗体为包被抗体，抗IPNV VP2单克隆抗体为检测抗体建立了IPNV双抗体夹心ELISA方法。优化反应条件为：兔抗IPNV VP2重组蛋白多克隆抗体包被浓度为1.28μg/mL，抗IPNV VP2单克隆抗体的工作浓度为1.34μg/mL，酶标二抗稀释比例为1∶2000，以P/N＞2，且OD490 nm ＞0.101494作为阳性判定标准。该方法的重复性变异系数均小于10％，与传染性造血器官坏死病毒（IHNV）、病毒性出血败血症病毒（VHSV）、鲤春病毒血症病毒（SVCV）、轮状病毒（HRV）无交叉反应。对41份虹鳟肝脏样品分别进行双抗体夹心ELISA和RT-PCR检测，结果双抗体夹心法与RT-PCR法检测符合率为97％，表明本实验建立的双抗体夹心ELISA检测方法检测IPNV具有较高的敏感性和特异性，可用于IPNV的病原学检测。