毛竹KDO8PS的原核表达纯化及晶体生长

• 作者: 屈亚平 张凤雪 张智俊 徐英武 王超莉 肖冬长
• 来源期刊: 浙江农林大学学报
• 关键词: 林木育种学 毛竹 脱氧辛糖酸-8-磷酸合酶 组织特异性表达 原核表达 蛋白纯化 结晶
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 页码范围: 515-520
• 页数: 6页
• 分类号: S722.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.11833/j.issn.2095-0756.2014.04.004

摘要

3-deoxy-D-manno-octulosonate (KDO) 8-phosphate synthase (KDO8PS)[EC 4.1.2.16]是KDO生物合成途径中的关键酶.采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,以毛竹Phyllostachys edulis新鲜实生苗为材料,分离得到竹子KDO8PS基因.通过对不同物种来源的KDO8PS进行氨基酸序列比对分析和半定量RT-PCR技术对该基因进行组织特异性表达分析.将PeKDO8PS基因构建入原核表达载体pET-28a,并在大肠埃希菌Escherichia coli原核表达系统中获得了KDO8PS的可溶性高表达.经nickel亲和层析和分子筛纯化2种方法对表达蛋白进行纯化.结果分析表明:该基因编码区全长876 bp,可编码291个氨基酸.PeKDO8PS与拟南芥Arabidopsis thaliana等植物来源的KDSA2的基因有很高序列一致性,而与微生物来源的KDO8PS序列一致性较低.分析毛竹各组织中KDO8PS基因的表达结果表明,该基因在根、茎和叶片中均有表达,但在根中相对表达量较高,此表达模式亦同拟南芥A tKDSA2类似.另外,发现KDO8PS在溶液(30 mmol·L-1Tris-HCl pH 8.0,200 mmol·L-1氯化钠)中以二聚体的形式存在,并且初步筛选出该酶晶体生长条件.此结果为PeKDO8PS蛋白的最终结构分析奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	屈亚平		1	2	1.0	1.0