稳定表达猪CYP3 A29基因的PAM细胞系构建及鉴定

• 作者: 任守文 周艳红 方晓敏 李碧侠 涂枫 王学敏 赵芳 郅西柱
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪 CYP3A29 肺泡巨噬细胞 稳定表达细胞系
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医?水产养殖
• 页码范围: 554-559
• 页数: 6页
• 分类号: S831.2
• 字数: 3153字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2014.03.016

摘要

为获得稳定表达CYP3A29基因的猪肺泡巨噬细胞系,利用RT-PCR方法获取猪CYP3A29基因序列后与克隆载体PMD18-T相连,得到PMD18-T-CYP3A29重组质粒并测序验证,利用Xho I和Not I双酶切重组质粒及pcDNA3.1(+)/zeo,回收后连接,构建重组真核表达载体pcDNA3.1(+)/zeo-CYP3A29,双酶切及测序验证其正确性,并以脂质体2000将其转染至猪肺泡巨噬细胞系3D4/21,经Zeocin抗性筛选,借助RT-PCR及Wesrern-blot鉴定该基因的表达情况。结果表明,成功获得表达CYP3A29的细胞株,且连续培养10代后,RT-PCR及Wesrern-blot仍能检测到该基因表达。说明,稳定表达CYP3A29基因的猪肺泡巨噬细胞系构建成功,该细胞系的成功构建为进一步研究分析猪CYP3A29基因的功能提供了可能。