PEGFP-C1-PHF6质粒的构建和鉴定

• 作者: 刘志刚 唐发清 宁勇 明平红 涂建成 王少敏 谢圣高
• 来源期刊: 武汉大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: PHF6 PEGFP-C1 重组质粒
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 技术与方法研究
• 页码范围: 757-760
• 分类号: R446.5
• 语种: 中文

摘要

目的:构建含有PHF6基因的PEGFP-C1-PHF6重组质粒并对重组质粒进行鉴定,为进一步研究其在核仁中的定位和功能奠定基础.方法:野生型293细胞中提取总RNA,反转录为cDNA后采用聚合酶链反应从总cDNA中扩增出PHF6基因,上下游分别引入EcoR Ⅰ及BamH Ⅰ酶切位点,双酶切后将其插入PEGFP-C1质粒中,构建PEGFP-C1-PHF6重组质粒,将重组质粒转化大肠杆菌DH5a进行克隆,提取质粒进行酶切和测序鉴定.脂质体法转染重组质粒至Hela细胞株中,Western blot检测PHF6基因蛋白的表达情况.结果:重组质粒经限制性内切酶EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切鉴定及DNA测序鉴定结果均证实PHF6基因已正确克隆到PEGFP-C1载体中,Western blot结果进一步证实PEGFP-C1-PHF6重组质粒构建正确.结论:成功并正确构建PEGFP-C1-PHF6重组质粒.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宁勇	湖北中医药大学检验学院	73	290	9.0	13.0
2	王少敏	湖北省孝感市中心医院检验科	22	101	6.0	9.0
3	谢圣高	湖北中医药大学检验学院	42	128	5.0	9.0
4	唐发清	广东省珠海市人民医院检验科	3	13	2.0	3.0
5	刘志刚	湖北省孝感市中心医院检验科	6	20	2.0	4.0
6	明平红	湖北中医药大学检验学院	3	7	1.0	2.0