鼠源pEGFP-C1-TMEM88真核表达质粒的构建及其功能研究

• 作者: 张濛 徐涛 李俊 李良云 杨俊发 潘林鑫 胡爽
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: pEGFP-C1-TMEM88 RAW264.7细胞 增殖 凋亡 白细胞介素-6 肿瘤坏死因子-α
• 年，卷（期）: 2019,（12）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 1865-1870
• 页数: 6页
• 分类号: R364.5
• 字数: 3939字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2019.12.006

摘要

目的 构建鼠源真核表达载体pEGFP-C1-跨膜蛋白88质粒(pEGFP-C1-TMEM88),并观察其对RAW264.7细胞中炎症因子分泌的影响和对RAW264.7细胞增殖和凋亡的影响.方法 在小鼠正常肝细胞株(AML-12)中提取RNA并且逆转录为cDNA,同时将引物稀释到10μmol/L,其余作为储备液.采用PCR技术扩增跨膜蛋白88(TMEM88)并鉴定,使用AxyPrep DNA凝胶回收试剂盒进行PCR产物的纯化回收.再对PCR产物及载体进行酶切回收,酶切片段连接后,进行连接产物的转化、挑菌、摇菌、质粒抽提.酶切鉴定后,送至测序鉴定.将构建好的质粒转染至小鼠单核巨噬细胞株RAW264.7细胞中,通过MTT实验和流式细胞术检测其对细胞增殖和凋亡的影响,并用ELISA技术检测炎症因子:白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在RAW264.7细胞中的表达.结果 测序结果显示pEGFP-C1-TMEM88真核表达质粒构建成功;MTT实验结果显示:48 h后过表达TMEM88组细胞的增殖率为(0.71±0.04),显著低于对照组(0.94±0.06)(F=21.55,P<0.01);流式细胞术结果显示:过表达TMEM88组细胞的凋亡率为(11.52±1.43)％,显著高于对照组(7.78±1.67)％(F=10.07,P<0.05);ELISA检测结果显示:转染pEGFP-C1-TMEM88质粒后的RAW264.7细胞中的IL-6、TNF-α表达较对照组升高.结论 TMEM88能够显著抑制RAW264.7细胞的增殖并促进其凋亡,TMEM88在RAW264.7细胞中炎症因子IL-6、TNF-α的表达升高,为进一步了解TMEM88的功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李俊	安徽医科大学药学院	493	5712	35.0	53.0
2	徐涛	安徽医科大学药学院	24	51	4.0	5.0
3	潘林鑫	安徽医科大学生命科学学院	19	40	3.0	5.0
4	李良云	安徽医科大学药学院	1	0	0.0	0.0
5	杨俊发	安徽医科大学药学院	1	0	0.0	0.0
6	胡爽	安徽医科大学药学院	3	3	1.0	1.0