携带脑组织特异性microRNA靶序列的重组日本脑炎病毒的构建与鉴定

• 作者: 叶青 曹文媛 朱舜亚 李晓峰 江振友 王洪江 秦成峰 秦鄂德
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 微RNAs 脑炎病毒,日本 感染性克隆 疫苗
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 429-432
• 分类号: R512.32
• 语种: 中文
• DOI: 10.11855/j.issn.0577-7402.2014.06.01

摘要

目的 构建携带脑组织特异性miRNA靶序列的重组日本脑炎病毒株.方法 利用反向遗传学技术将脑组织特异性的miR-124和miR-125靶序列引入日本脑炎病毒cDNA全长感染性克隆,将重组质粒用Xho Ⅰ线性化后采用SP6转录试剂盒进行体外转录,以获得的RNA转染BHK-21细胞,37℃、5％CO2孵箱培养3d后取上清盲传1代观察细胞病变,并通过RT-PCR、细胞蚀斑形成实验和病毒生长曲线等方法对恢复病毒的生物学特性进行鉴定.结果 成功在BHK-21细胞中拯救获得了携带miRNA靶序列的重组病毒,与野生型病毒株具有相似的蚀斑形态和生长特性.结论 通过反向遗传学技术获得了携带脑组织特异性miRNA靶序列的重组日本脑炎病毒,为miRNA介导的组织特异性减毒机制研究奠定了基础.