西农萨能羊脂肪分化相关蛋白(ADRP)基因的原核表达、纯化及多克隆抗体制备

• 作者: 余康 朱江江 李芳 石恒波 罗军 许会芬
• 来源期刊: 中国畜牧杂志
• 学科: 农学
• 关键词: ADRP 原核表达 亲和纯化 多克隆抗体 羊
• 年，卷（期）: 2014,（11）
• 所属期刊栏目: 遗传育种
• 页码范围: 5-9
• 页数: 5页
• 分类号: S827.2
• 字数: 3470字
• 语种: 中文

摘要

在大肠杆菌中表达西农萨能羊脂肪分化相关蛋白(ADRP),并制备其多克隆抗体.以实验室保存的pMD 19-T-A DRP质粒为模板,扩增ADRP的CDS区,将其克隆到pET32a(+)载体,阳性克隆转化到大肠杆菌菌株E.coli BL21 (DE3)中诱导表达,优化融合蛋白表达条件,使用Ni-NTA亲和层析柱纯化融合蛋白,纯化的ADRP蛋白经复性后免疫兔子制备多克隆抗体,ELISA和Western blot检测血清效价和特异性.结果表明:成功构建pET32a(+)-ADRP原核表达载体并诱导其表达,获得最佳表达条件,即37℃、0.5 mmol/L IPTG诱导6 h;ELISA检测显示抗体效价达1∶64 000;经Western blot鉴定,制备的多克隆抗体能特异性结合原核表达以及乳腺上皮细胞表达的ADRP蛋白.本实验成功表达、纯化了ADRP融合蛋白,获得具高特异性、高效价的兔抗ADRP多克隆抗体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	罗军	西北农林科技大学动物科技学院	91	625	13.0	20.0
2	李芳	西北农林科技大学动物科技学院	9	52	4.0	7.0
3	许会芬	西北农林科技大学动物科技学院	6	18	2.0	4.0
4	余康	西北农林科技大学动物科技学院	4	40	2.0	4.0
5	朱江江		13	58	5.0	7.0
6	石恒波	西北农林科技大学动物科技学院	9	29	3.0	5.0