结核分枝杆菌CFP32蛋白的原核表达及其细胞免疫学检测价值评价

• 作者: 万婷 万李 单法 孟闯 徐正中 文志发 殷月兰 焦新安 陈祥
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 结核分枝杆菌 CFP32蛋白 细胞免疫 刺激原
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 578-582
• 页数: 5页
• 分类号: R378.91+1
• 字数: 3467字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2014.06.007

摘要

目的 克隆、表达与纯化结核分枝杆菌CFP32蛋白,并对其进行细胞免疫学特性评价.方法 PCR扩增cfp32基因片段,与pET-30a(+)构建重组表达质粒,在大肠杆菌中诱导表达,对融合蛋白进行纯化,ELISPOT试验测定其细胞免疫应答,通过牛结核外周血IFN-γ释放试验,评价其作为刺激原的能力.结果 构建了正确基因序列的重组质粒,并在BL21(DE3)中高效可溶性表达,融合蛋白大小为32 ku,纯度达91.8％. ELISPOT显示CFP32蛋白刺激机体分泌IFN-γ和IL-4的细胞数相当,呈现Th1/Th2的平衡.在牛结核外周血IFN-γ释放试验中,其阳性符合率和阴性符合率分别为40％和73.3％,与牛型PPD刺激结果的相关系数为0.684.结论 成功构建CFP32蛋白重组表达菌,该蛋白引起的免疫应答趋向于Th1/Th2的平衡,并且有作为刺激原用于牛结核病检测的潜力.