人源TNFα的原核表达及活性测定

• 作者: 张帆 李翠琳 杜军 王昊 郭强 陈丹扬
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: TNFα SUMO 原核表达 生物学活性
• 年，卷（期）: 2014,（8）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1-6
• 分类号: Q789
• 语种: 中文
• DOI: 10.13523/j.cb.20140801

摘要

目的:利用SUMO标签构建人TNFα原核表达栽体,通过表达及纯化获得重组蛋白,为深入研究和利用人TNFα奠定基础.方法:利用PCR技术,从质粒pET32a-hTNFα中扩增出人TNFα成熟肽编码序列,并在其上游添加SUMO标签,与原核表达载体pET28a连接,构建表达质粒pET28a-SUMO-hTNFα.在BL21(DE3)工程菌中表达融合蛋白,经Ni-NTA纯化体系纯化,切除SUMO标签,纯化获得hTNFα成熟蛋白.CCK-8法检测TNFα对L929细胞的细胞毒性,以测定TNFα的生物学活性.结果:成功构建pET28 a-SUMO-hTNFα原核表达质粒,酶切鉴定和测序分析与预期结果完全一致.在BL21 (DE3)工程菌中实现了融合蛋白的可溶性表达.经纯化、水解酶切除标签及再次纯化获得hTNFα成熟肽.CCK-8法检测得所制备的TNFα蛋白ED50约为12.8μg/ml.结论:成功构建原核表达载体pET28 a-SUMO-hTNFα,经表达、纯化、酶切及再纯化,获得有生物活性的hTNFα蛋白,为深入研究和利用hTNFα奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杜军	中山大学药学院微生物与生化制药实验室	61	250	7.0	12.0
2	张帆	中山大学药学院微生物与生化制药实验室	44	129	8.0	9.0
3	王昊	中山大学药学院微生物与生化制药实验室	8	21	3.0	4.0
4	郭强	中山大学药学院微生物与生化制药实验室	7	17	3.0	4.0
5	陈丹扬	中山大学药学院微生物与生化制药实验室	4	2	1.0	1.0
6	李翠琳	中山大学药学院微生物与生化制药实验室	2	5	1.0	2.0