优化易错PCR条件以提高毕赤酵母GAP启动子文库突变效率

• 作者: 储炬 秦秀林 钱江潮
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 易错PCR 突变效率 随机突变 毕赤酵母 GAP启动子
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 211-217
• 页数: 7页
• 语种: 中文

摘要

高效的随机突变策略对于构建含有丰富突变体的启动子文库至关重要。为了建立一个突变率适中并能获得较多有益突变子的易错PCR（error-prone PCR，EP-PCR）条件，实现毕赤酵母GAP启动子的高效突变，对EP-PCR反应条件进行了优化。考察了模板浓度、反应循环数和Mg2+浓度对EP-PCR的产物得率和突变率的影响后，确定了适于GAP启动子突变的EP-PCR条件：模板浓度、反应循环数和Mg2+浓度分别为1 ng/μL、25和10 mmol/L。优化EP-PCR条件后，GAP启动子突变率为1.1%，连续进行3轮EP-PCR后突变率可达到4.0%。利用优化后EP-PCR对GAP启动子进行随机突变，筛选了250个突变子，获得5个启动子强度高于野生型GAP启动子的突变体，有益突变达到了2%，可用于构建GAP启动子文库。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	储炬	华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室	227	1871	22.0	29.0
2	钱江潮	华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室	20	129	7.0	10.0
3	秦秀林	广西大学生命科学与技术学院	7	15	3.0	3.0