重组腺病毒载体Ad5-hVEGF165-EGFP的构建与鉴定

• 作者: 余学元 朱小峰 江燕 邱宇
• 来源期刊: 航空航天医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人血管内皮细胞 基因治疗 牙周组织再生 5型复制缺陷型腺病毒
• 年，卷（期）: 2014,（7）
• 所属期刊栏目: 论 著
• 页码范围: 896-898
• 页数: 3页
• 分类号: R318
• 字数: 2110字
• 语种: 中文

摘要

目的：人血管内皮生长因子（的hVEGF165）为靶基因，增强型绿色荧光蛋白（ EGFP ）基因构建体的复制缺陷型腺病毒载体，为基因治疗牙周进一步再生奠定了基础。方法质粒的pDC316-的VEGF165为模板， PCR扩增基因片段进行消化，获得的hVEGF165用于连接到含有绿色荧光蛋白标记基因重组质粒的消化方法的pDC316-MCMV-EGFP质粒载体， PCR鉴定和双酶切证实成功构建重组质粒；使用ADMAX包装系统，改造的质粒共转染用质粒骨架293包装细胞系和重组病毒的扩增；扩增病毒的离子交换纯化； TCID50测定病毒粒子和效价的数目；的荧光的荧光显微镜重组腺病毒表达。结果 PCR鉴定，酶切分析和测序证实成功构建人VEGF基因的携带绿色荧光蛋白标记（的hVEGF165）重组质粒的pDC316-的hVEGF165-MCMV-EGFP和同源重组腺病毒Ad5的-的hVEGF165-EGFP的成功。扩增和纯化后，腺病毒颗粒的数量测量5.4×1011 VP/mL，约2.0，为1.8×1010CCID50/mL的滴度OD260/OD280值。结论成功构建携带hVEGF165基因重组腺病毒载体Ad5-hVEGF165-EGFP并获得高滴度病毒颗粒，为hVEGF165基因功能研究以及细胞移植、基因治疗提供有效的工具。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱小峰	福建医科大学附属第一医院口腔科	24	53	5.0	6.0
2	邱宇	福建医科大学附属第一医院口腔科	11	36	3.0	6.0
3	余学元	福建医科大学附属第一医院口腔科	3	19	1.0	3.0
4	江燕	福建医科大学附属第一医院口腔科	5	2	1.0	1.0